產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Elabscience® One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit 是一款靈敏度高且能快速簡(jiǎn)便地檢測(cè)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)品。本試劑盒可通過流式細(xì)胞儀來進(jìn)行懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞的流式凋亡檢測(cè)。

檢測(cè)原理：

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些特異性的 DNA 內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組 DNA。使得凋亡細(xì)胞的DNA被切割成180~200bp片段，在瓊脂糖凝膠上通常以180~200bp的階梯狀遷移。細(xì)胞經(jīng)過固定破膜后，TdT 酶 （脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶）將熒光標(biāo)記的 dUTP 連接到細(xì)胞斷裂DNA暴露的3'-OH 末端，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)dUTP偶聯(lián)物發(fā)出的熒光信號(hào)，從而來檢測(cè)晚期凋亡。

保存條件：

-20°C 保存，保質(zhì)期一年。Labeling Solution 需避光保存，Labeling Solution、Fixation Buffer、Permeabilization Buffer 需避免反復(fù)多次凍融，建議分裝保存。

常見問題及解決方法：

1. 細(xì)胞碎片較多

可能原因：

固定不充分，破膜導(dǎo)致細(xì)胞破碎。破膜時(shí)間過久，破膜溫度較高。

解決方法：

適當(dāng)延長(zhǎng)固定的時(shí)間，充分固定細(xì)胞后再破膜。破膜時(shí)間應(yīng)控制在 10 min，最長(zhǎng)不超過 15 min，保證在冰上破膜。

2. 未檢測(cè)到凋亡細(xì)胞群

可能原因：

細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡失敗。細(xì)胞數(shù)目較多，細(xì)胞透膜不che底。用含有EDTA 等蝥合劑的試劑洗滌細(xì)胞，導(dǎo)致 TdT 酶失效。

解決方法：

設(shè)置不同的濃度梯度和誘導(dǎo)時(shí)間，找到合適的誘導(dǎo)條件。

適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞數(shù)量，或增加Permeabilization Bufer 的劑量，合理充分破膜。

使用不含螯合劑的洗滌液。

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